随着生物医药企业“出海”步伐的加快，除抗生素产品外，抗体药也成为了我国出海热门品类。全球药品监管要求持续提升，热原控制的合规要求迎来了关键升级！（点击链接了解更多→抗生素药品出海合规：关注非内毒素热原控制与MAT检测关键要求）

仅使用细菌内毒素检测法（BET，Bacterial Endotoxin Test）可能不足以完全评估控制热原风险，因此非内毒素热原（NEP,Non-Endotoxin Pyrogens）风险评估成为抗体药欧美药监的核心审查点。

一、MAT方法替代历程

(1) 欧洲药典（EP）法规要求

• 2025.07.01 起，EP 11.8 删除家兔热原法（RPT），MAT为唯一推荐替代方法；

• EP12明确：仅用BET需提供NEP风险评估；MAT为可检测所有热原（含内毒素和NEP）的药典方法；

• 2026年起，EDQM核查将NEP控制策略列为高频缺陷项。
  
  

(2) 美国药典（USP）及相关标准

• USP<1085>：经验证的等效的MAT法/ BET法，可替代家兔热原试验。

• TRS 1043（单抗质量控制指南）：仅用BET法时应进行NEP风险评估来确定进行致热原试验的必要性。而RPT重复性差、存在种属差异等，推荐MAT用于终产品热原放行检测。

• USP替代性热原测试方法征集：2026年2月27日开始，全球征集非动物替代热原检测数据，重点评估 MAT，为USP-NF的潜在修订或新增通则提供信息。

二、NEP风险评估与控制

根据EP致热原性5.1.13章节要求：

• 为排除产品中存在NEP的可能性，建议在生产工艺开发阶段同时使用相同的3 批次进行BET和MAT交叉验证（若仅能提供1批次样品，则需对该批次开展3次独立试验以完成验证，且试验结果需满足可重复性精度要求）。

• 若生产工艺发生可能影响产品热原性的变更（例如使用不同原材料、变更生产场地或工艺参数），需重新进行风险评估。

• 对于所有拟用于肠胃外给药的产品，若无法排除NEP存在，则必须实施MAT试验。

2.6.30-6.5章节中关于NEP方法验证要求：

• 预实验应包括使用至少2种NEP配体（如肽聚糖、脂磷壁酸、合成细菌脂蛋白、鞭毛蛋白等）对检测系统进行验证，其中至少1种需加标至待检制剂中。

• 若有历史批次中已证实受NEP污染物污染的阳性样品，可优先使用；若没有，则可选择生产工艺可能引入的NEP对检测系统进行验证。

抗体药NEP发补描述实例：

关于家兔热原试验，应开展风险分析以评估产品中热原的潜在存在情况，并按照现行欧洲药典要求，采用体外方法进行热原检测。

如需获取抗体药NEP发补案例，可与我司联系。

三、抗体药工艺过程中NEP污染的关键诱因

抗体药的开发生产涉及细胞株构建、细胞培养、蛋白纯化、制剂灌装等多个环节，NEP的产生与引入贯穿抗体药生产全流程，风险评估需覆盖所有可能导致致热性物质及相关影响因素。

以下为风险评估需考虑因素的非穷尽清单：

• 细胞培养：工程细胞的生长环境易滋生革兰氏阳性菌如脂磷壁酸（LTA）、肽聚糖等典型 NEP，且细胞自身代谢产生的宿主蛋白、内源性毒素也会成为NEP的来源。
  

• 纯化环节：层析填料、过滤耗材和缓冲液的去热原能力和残留，以及工艺操作中的交叉污染，可能会引入NEP。
  

• 其他：制剂制备的辅料、灌装环节的无菌环境管控不当，也可能会引入NEP。

这些NEP污染无法被BET识别，且易与微量内毒素协同作用，放大体内细胞因子分泌，引发严重的临床热原反应，成为抗体药临床应用的安全隐患。因此，欧美监管对抗体药NEP检测作出了硬性要求。

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