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自2025年7月1日起，欧洲药典正式全面禁止使用家兔热原检测法（RPT，Rabbit Pyrogen Test）并明确将单核细胞活化反应法（MAT，Monocyte Activation Test）作为首选替代方法，这是全球药典领域在推动动物试验替代方法方面迈出的重大一步。从依赖于动物生理反应的“黑箱”测试，转向基于明确分子机制的、更精准的体外检测，药品质量控制技术得到进一步提升。
MAT检测：细胞哨兵，精准量化热原
MAT法的核心原理，是利用人源单核细胞系来模拟人体对热原的免疫应答。当样品中存在各类型热原时，单核细胞系利用细胞含有的各类Toll样受体识别各类型的热原并产生固有免疫反应，释放促炎性细胞因子（即内源性热原物质：如 IL-6、IL-1、TNF-α）；通过测定释放的细胞因子水平，并与细菌内毒素校准曲线比较，计算出样品中热原污染物的等效浓度。
与RPT和细菌内毒素检测法（BET，Bacterial Endotoxin Test）相比，MAT方法展现出的优势是既能全面地识别各类热原，降低热原漏检风险，又能直接与热原挂钩，体现真实的热原量效关系。
1. 抗生素类样品MAT检测难题
部分抗生素会干扰细胞状态，既可能抑制反应造成假阴性，也可能增强或非特异性激活细胞导致假阳性。使用MAT方法进行抗生素类样品的热源检测，则需要解决抗生素样品的这个特殊性问题，才能确保MAT检测结果的稳定可靠。
抑制作用（最主要、最危险的干扰类型） | 增强或非特异性激活作用（相对少见） |
1. 直接细胞毒性 | 4. 非特异性细胞激活 |
2. 抑制细胞因子合成与释放 | 5. 与内毒素的协同作用 |
3. 清除或中和热原 | 6. 制剂辅料的干扰 |
多黏菌素B（Polymyxins B）是一类多阳离子两性抗生素，其分子结构中由亲水性多肽环和疏水性脂肪酸链组成。该结构中的L-Dab基团有大量正电荷，能像“磁铁”一样，与革兰氏阴性菌内毒素脂多糖（LPS）分子中带负电荷的Lipid A区域发生高强度、高亲和力的结合。这种相互作用在体内是其发挥抗菌活性的机制，然而在体外MAT检测体系中，却直接“中和”了内毒素的生物活性，使其无法有效激活人源单核细胞。
在加标回收实验中，多黏菌素B（Polymyxins B）表现出极强的抑制作用。如果样品中存在内毒素，其信号会被多黏菌素B强力屏蔽，导致检测结果假阴性，严重干扰MAT方法对药品热原污染风险的准确评估。
2. PyroSHENTEK MAT热原检测方案：标准化检测试剂盒+独创前处理优化
湖州申科MAT热原检测试剂盒：基于单核细胞系开发，通过量化人源单核细胞的免疫应答，检测样品中可能存在的热原，包括内毒素和非内毒素的热原（即引起人发热的细菌、病毒、真菌）等，具有以下特点：
使用单核细胞系进行体外实验，不涉及人全血，无伦理风险。
联合国内权威机构完成室间验证，与传统RPT法结果高度一致。
根据《中国药典》9012和ICH Q2等分析方法指导原则进行全面性能验证。
完善的单核细胞系细胞库资料，经国际保藏机构授权使用，无法律风险，可用于全球申报。
ISO13485生产管理体系，稳定生产质量可靠的细胞：
‣ 细胞活率与密度检查，保证每批次细胞质量；
‣ 安全性检测（支原体检查、无菌检查、内外源病毒检查等）；
‣ 稳定性考察细胞遗传信息；
‣ 功能性检测（热原反应性、TOLL样受体表达等）。
PyroSHENTEK热原检测试剂盒（MAT 法)
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“开源”的前处理优化方案
基于自有MAT检测平台，开发了独创的前处理优化组合方案，能够有效解除抗生素对LPS的“中和”作用，确保内毒素信号被准确检出，有效解决抗生素类样品干扰，提供可靠的结果保障。
3. 应用案例
（1）背景：
多黏菌素E甲磺酸钠样品：
• CLC：0.8 EU/mg
• LOD：0.0125 EU/mL
• MVD：2500+ 倍
（2）核心问题：
使用MAT法检测，加标回收率不合格。
（3）湖州申科解决方案：
优化前处理方式，采用MAT前处理试剂盒，解决“屏蔽”效应，检测结果得到根本性改善。
• 加标回收率：
从无法测出/远低于50%，稳定提升至70-110%范围内。
• 方法学验证：
精密度、准确性各项指标符合EP要求；
前处理过程不引入额外干扰，完全兼容后续MAT检测。
• 检测结果：
CLC＜0.8 EU/mg，产品质量符合EP要求。
