在检测复杂生物样品时，同质化程度高的单核细胞系检测稳定性相比混合细胞PBMC有着明显优势，面对复杂样品基质以及培养环境的波动影响表现出更好的耐受性。

那么，单核细胞活化试验检测（MAT）中，细胞孵育如何实现只识别热原相关分子，而不受样品基质干扰？Toll样受体（Toll-Like Receptors，TLRs）不可忽视。

01 如何攻克MAT检测适用性难题？精准评估TLRs是关键

TLRs是免疫细胞表面负责识别病原体的跨膜受体蛋白^[1]，广泛分布于细胞表面及胞内膜结构，这支“受体部队”由10种功能性亚型组成，通过协同作战实现对外源威胁的全面排查。

具体来看，各亚型的分布极具靶向性：TLR1、2、4、5、6部署在细胞表面，TLR3、7、8、9则位于胞内体^[2]，部分亚型还可在细胞膜与胞内体间灵活穿梭。这种精准的分布模式，正是其能“各司其职”精准识别不同外源性热原（PAMPs）的关键（详见表1^[3]）。

一言蔽之，MAT单核细胞系对热原的免疫应答，实际全依赖于胞体的“斥候”部队—TLRs。当外源性热原与对应TLRs完成特异性结合后，一场免疫应答就此开始。

02 免疫应答24h：一场微观世界的“信息接力”

在MAT检测中，单核细胞与样品共孵育的24小时 ，正是这场免疫应答的关键阶段。

‣ TLRs与PAMPs结合后发生二聚化（homodimerization），其胞内TIR结构域随即化身“免疫信号检录处”，迅速招募适配器蛋白MyD88（髓样分化因子88）；

‣ MyD88“检录通过”后，作为“第一棒接力员”启动信号传递，向下游传递“泛素化接力棒”^[3]；

‣ 核心“接棒手”IKK复合物接到信号后，即刻磷酸化NF-kB的抑制因子IkB，使NF-kB得以释放；

‣ 随后，“终末信使”NF-kB冲入细胞核^[3]，启动炎症因子相关基因转录程序，驱动TNF-α、IL-1β、IL-6等细胞因子（内源性热原）的表达^[4]。

至此，一场精密衔接的免疫信号传递过程全部完成，最终激活机体形成对炎症与感染的系统性防御，并引发包括发热在内的多种生理反应，而这些细胞因子也构成了MAT检测中关键的热原标志物。

图2 免疫应答传递示意图

03 精准评估TLRs：打响单核细胞免疫应答首战

PyroSHENTEK™热原检测试剂盒中的单核细胞系，采用Western blot技术，对TLR跨膜蛋白进行了系统性的验证（如图3所示）。

该过程相当于构建细胞的“全域感知网络”，使MAT细胞凭借完整的TLR表达谱，全面覆盖不同类型热原的识别需求，从源头奠定检测能力的坚实基础。

图3 PyroSHENTEK™ MAT细胞TLRs检测结果

细胞对热原的响应能力，高度依赖其反应速度与作用效率。相关研究为此提供了关键理论支持，证实单核细胞在LPS等热原配体诱导下的分化过程，具有明确的浓度与时间依赖性^[2]。

在广泛文献研究的基础上，结合对免疫应答机制的深度分析，PyroSHENTEK™热原检测试剂盒优化并确立了MAT细胞分化诱导的关键参数，显著提升了细胞在复杂样品环境中的响应能力（样品适用性数据详见表2），并在不同浓度的非内毒素热原检测中也表现出良好的响应特性（结果详见图4）。

表2 申科MAT样品适用性列表

图4 PyroSHENTEK™ MAT细胞针对不同类型及浓度Non-Endotoxin Pyrogens（NEP）的响应反馈

04 PyroSHENTEK™ 热原检测试剂盒（MAT 法）

• 合规溯源筑根基：细胞获商业授权，溯源链条清晰可查，完全匹配申报合规要求，从源头规避风险；

• 多维特训拓边界：聚焦细胞性能优化、样品前处理升级双维度，以 “特训策略” 持续突破检测场景限制，拓展适用范围；

• 稳定质量强支撑：通过全面性能验证，且经监管机构与客户双重测试认证，性能表现稳定可靠，保障检测结果一致性；

• 实战案例证实力：拥有欧盟市场成功申报案例，将实验室的科学优化转化为落地可行的解决方案。

参考文献：

[1] Kaczmarek, A., et al. (2020) ‘Expression of surface and intracellular Toll-like receptors by mature mast cells’, PubMed. Available at: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28450795/ (Accessed: 24 October 2025)

[2] Mita, Y., Dobashi, K., Nakazawa, T. and Mori, M. (2001) ‘Induction of Toll-like receptor 4 in granulocytic and monocytic cells differentiated from HL-60 cells’, British Journal of Haematology, 112(4), pp. 1041–1047. doi: 10.1046/j.1365-2141.2001.02658.x. Erratum in: British Journal of Haematology, 115(3), p. 715. PMID: 11298604

[3] Blasius, A.L. and Beutler, B. (2010) ‘Intracellular toll-like receptors’, Immunity, 32(3), pp. 305–315. doi: 10.1016/j.immuni.2010.03.012. PMID: 20346772

[4] Tanaka, T., Narazaki, M., Masuda, K. and Kishimoto, T. (2016) ‘Regulation of IL-6 in Immunity and Diseases’, Advances in Experimental Medicine and Biology, 941, pp. 79–88. doi: 10.1007/978-94-024-0921-5_4. PMID: 27734409