分枝杆菌是一类细长弯曲的杆菌，因有分枝生长的趋势而命名。分枝杆菌种类较多，可分为结核分枝杆菌复合群（MTB）、非结核分枝杆菌（NTM）和麻风分枝杆菌三类。目前已报道的分枝杆菌超200种，其中50余种具有致病性，如致病性结核分枝杆菌进入机体后，将引起多种组织器官的结核病，已成为危害人类健康的主要传染病之一。

法规与监管要求:

生物制品的生产常涉及细胞培养。与细胞培养相关的材料，均要求进行风险评估并保证无分枝杆菌污染。各国药典和药品监管机构对生物制品生产都提出了分枝杆菌检查及方法要求，并明确要求病毒疫苗种子批、基因工程疫苗种子批以及细胞库等要进行分枝杆菌检查。
近年来，细胞治疗药物发展迅速，Car-T细胞治疗药物接连获批上市，干细胞治疗药物获批进入临床试验。因细胞产品的特殊性，如何确保细胞治疗药物相关的起始材料安全性颇受行业重视。

国家药监局等监管机构相继发文强调对细胞库的检定要求，分枝杆菌检测已然列入必检项。

分枝杆菌检测方法

常规的分枝杆菌检测方法有培养法和豚鼠法，都需要耗费较长的检测时间（培养法56天，豚鼠法42天左右）。细胞治疗产品等新型生物制品的特殊性，如货架期短，导致这2种常规方法均无法满足细胞制品生产的时间要求。

因此，对于细胞制品亟需建立快速、可靠的分枝杆菌检测方法。分枝杆菌快检方法，特别是在灵敏度、特异性和时效性上具有显著优势的NAT方法，如荧光探针qPCR法越来越受到行业的关注，需求与日俱增。WHO、FDA指南和《欧洲药典》、《中国药典》等均指出，可用经过全面验证的NAT法替代培养法或豚鼠法。与支原体检测区别的是，目前相关法规并未对分枝杆菌NAT检测替代培养法或豚鼠法的灵敏度做出具体要求。此外，从风险评估角度出发，生物制品相关的分枝杆菌快检检测范围必须包括致病性分枝杆菌，并应覆盖尽可能多的分枝杆菌。

EP10.0 2.6.7关于对分枝杆菌NAT检测法的验证要求：

01 检测限：

检测限的界定要求：必须针对每种分枝杆菌确定阳性检测临界值，每种分枝杆菌必须至少进行三次独立的10倍梯度稀释液进行检测，且每次检测中每种稀释液浓度都必须制备平行管进行检测，以使各稀释液浓度的检测结果总共能达到24个。阳性临界值指的是至少能够使95%的试验检测得到阳性结果的分枝杆菌浓度，即至少要取得23个有效的阳性检测结果。

02 特异性：

NAT检测的挑战是要使用对多种分枝杆菌都具有适用性和特异性的PCR引物。往往覆盖的检测种类越多，PCR引物也越可能检测到其他种类的细菌。例如，放线菌与分枝杆菌具有密切的系统进行相关性，PCR可能会检测到这种细菌属，从而产生交叉检测的情况。

03 稳定性：

需要证实NAT检测法是否能够在方法参数发生人为导致的微小变化，或检测方法有所变化时不受影响。EP2.6.7.章列举了一些变化示例和需要检测的试验方案。

MycoSHENTEK^®分枝杆菌qPCR检测

湖州申科推出经全面验证的分枝杆菌qPCR检测产品，可实现广谱分枝杆菌DNA快速检测，满足生物制品，特别是细胞制品生产相关的分枝杆菌检测要求。MycoSHENTEK^®分枝杆菌qPCR检测试剂盒涵盖了NCBI数据库中可查询到的100多种分枝杆菌属DNA序列，根据NAT方法要求进行了全面性能验证，灵敏度达10 CFU，检测可靠，符合药典要求。

产品性能：

01 符合法规：

• 按照法规要求进行全面验证，可提供验证报告；

• ISO13485体系认证，标准化生产，高质量保证。

02 灵敏度高:

• 达到10 CFU，（含10⁷细胞基质），实验验证检测了草、结核、新金色等14种分枝杆菌。

03 特异性高:

• 验证了近50种非分枝杆菌微生物和常用工程细胞。

04 体系可靠:

• 检测试剂含内部质控（IC）和阳性质控（PC），有效避免假阴性和假阳性结果的出现；

• 采用多重PCR，单个反应孔同时检测分枝杆菌信号和内控信号，减少试剂成本；

• 采用抗干扰热启动酶和反应体系，耐受多种干扰物质；

• 采用dUTP-UNG，避免污染风险。

05 操作便捷:

• 简单快速，可自动化前处理，只需6小时完成样本处理和qPCR检测。

06 适用性强:

• 验证了多种基质样本类型，尤其适用于高浓度细胞样本（10⁷ CHO、293T和Vero细胞）。