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宿主残留蛋白（HCP）作为生物制品生产过程中潜在的杂质，可能引发免疫反应，影响产品的安全性和有效性。[1-2]
如何精准检测HCP？这不仅是法规的硬性要求，更是守护患者用药安全的核心防线。但检测结果常因样品、方法、操作等因素“飘忽不定”，稍有不慎便可能埋下隐患。今天，我们将深度剖析影响HCP检测结果的重要关键因素，帮您避开检测“雷区”。
样品质量是基础
1、样品基质
HCP检测贯穿生物制品生产的全过程，涉及收获、纯化、制备等多个步骤。在不同样品基质下，HCP检测可能存在巨大差异。例如，对于含有佐剂的疫苗，由于佐剂的干扰，难以在成品中对HCP项目进行检测，因此一般在吸附工艺之前的原液阶段进行检测。[3]
2、样品处理与保存
样品的收集、处理和保存方式对检测结果至关重要。不正确的处理可能导致蛋白降解或变性，从而影响检测结果。例如，若采用历史批样品作为内部质控品，应结合其稳定性数据合理制定保存条件及保存期限，以保证检测方法的准确性和稳定性。
方法选择是关键
1、检测技术原理
酶联免疫吸附法（ELISA法）和液相色谱-质谱联用方法（LC-MS法）是目前HCP检测的两大常用方法。文献统计显示，目前对于总HCP定量，ELISA仍是主流方法；MS法作为对特定蛋白（例如，高风险蛋白）的鉴定和定量，已成为重要的互补手段。[4-6]
2、试剂与耗材质量
检测过程中使用的试剂和耗材的质量直接影响检测结果的准确性。低质量的试剂可能导致假阳性或假阴性结果。例如，抗体的特异性和亲和力不足，可能导致ELISA检测中的交叉反应；抗原代表性不强或是抗体覆盖率低，可能会导致漏检；稀释液抗干扰能力弱，可能影响检测准确性。
案例研究表明，采用定制化方法替代原有商业化试剂盒后，抗原代表性和抗体覆盖率明显提高，HCP检测值整体升高。[7]
3、检测方法的验证
通过稀释线性实验，确定样品的最低需求稀释度（MRD）。目前，行业内主流有计算方式有两种，应根据特定样品类型及申报条件选择合适的稀释线性计算方法。[5,8]
操作规范是保障
1、人员操作规范
一方面，实验人员的专业技能和经验对检测结果的准确性有很大影响。熟练的实验人员能够准确地进行样品处理、试剂配制和仪器操作，减少人为误差。
另一方面，一个合理的HCP检测方法，在开发及应用时，应当考虑操作的合理变动区间（即耐用性）并设置相质控，从程序上尽量消除人为误差对结果的影响。
2、操作流程标准化
严格遵循标准操作流程（SOP）是确保检测结果可靠性的关键。操作步骤的不规范可能导致结果的重复性差或误差增大。目前，市面上已有全自动化HCP ELISA检测系统（←点击查看），可以完成从样品制备、孵育、洗板至数据采集等一系列操作，结合实验室信息管理系统（LIMS），可以实现“输入即输出”，减少流程误差。[9]
综上所述，影响宿主残留蛋白检测结果的因素贯穿于检测全过程，每一个环节都可能对最终的检测结果产生影响。
湖州申科建立了多种HCP检测分析技术平台，涵盖商业化试剂盒、平台型试剂盒开发、抗体覆盖率验证、靶向质谱技术、方法学验证及常规样品检测、全自动ELISA设备系统等，应用于保障生物制品的质量、安全性等多个关键质量属性，从而更好地守护患者的用药安全，推动生物制药行业的健康发展。
参考文献
[1] Tuameh, A., Harding, S. E., & Darton, N. J. (2023). Methods for addressing host cell protein impurities in biopharmaceutical product development. Biotechnology Journal, 18, e2200115.
[2] Bracewell, D.G., Francis, R. & Smales, C.M. (2015), The future of host cell protein (HCP) identification during process development and manufacturing linked to a risk-based management for their control. Biotechnol. Bioeng., 112: 1727-1737.
[3] 李敏,常卫红.生物制品质量标准研究与建立一般原则的探讨[J].中国新药杂志,2017,26(16):1887-1893.
[4] Jones, M. , Palackal, N. & Wang, F, et al. (2021). “High-risk” host cell proteins (HCPs): A multicompany collaborative view. Biotechnology Bioengineering. 118, 2870–2885.
[5] United States Pharmacopeia (2024). General Chapter, <1132> Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals. USP-NF. Rockville, MD: United States Pharmacopeia.
[6] United States Pharmacopeia (2025). General Chapter, <1132.1> Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals by Liquid Chromatography-Mass Spectrometry. . Rockville, MD: United States Pharmacopeia.
[7] 李怡君,寇雅真,魏开坤,等.生物制品生命周期管理中分析方法变更的审评考虑和案例研究[J].中国新药杂志,2024,33(11):1102-1108.
[8]https://www.cygnustechnologies.com/resources/guidelines/
[9]https://www.shenkebio.com/product/2254.cshtml
