无菌检测是生物制品质量控制中不可或缺的一环，是确保生物制品安全的必要措施。因此各国药典和药品监管法规对生物制品生产中的无菌检测（细菌&真菌）都作出了明确的规定，包括《CAR-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》、《细胞治疗产品研究与评价技术指导原则（试行）》、《人源性干细胞产品药学研究与评价技术指导原则》等相关指导原则均要求完成无菌检测。

随着生物行业的快速发展，新型细胞制品的大量涌出，对无菌检测提出了新的要求。由于细胞制品的特殊性，基于培养法的检测方法无法满足其无菌放行检测的时限，因此监管机构鼓励研究者开发更适合细胞制品无菌检测的替代方法。

• 无菌检测替代方法的法规要求：

各国法规均对无菌检测替代方法的要求进行了较为详细的描述，详见表1。

表1 各国法规或指南对于无菌检测方法替代的要求

• 常见无菌检测替代方法：

对于法规中提到的多种无菌替代方法，其检测原理大不相同，各种方法的特点见表2。

表2 各国药典推荐的微生物快速检测方法

在上述这些方法中，核酸扩增—qPCR方法灵敏度高、特异性强、检测时间短等，并已被广泛应用于生物制品的相关检验中，然而其通过真菌细菌核酸检测进行无菌快速检查会面临巨大的挑战：❶ 细菌在环境中无处不在，存在环境因素造成的假阳性问题；❷ 无法区分检测到的核酸阳性是来自样品中的死菌还是活菌。

如何通过核酸检测方法来实现真菌细菌的快检，这要求在整个快检过程中需进行严格的控制，这对保障实验结果的准确性具有重要意义。

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湖州申科经过前期大量的研发实验和数据积累，形成完整的SHENTEK qPCR真菌细菌DNA检测方案，以实现无菌快检，极大程度上降低了实验结果假阳性，为细胞制品的无菌检查提供准确、稳定的检测结果，完成细胞制品的快速放行。

❖ 试剂盒体系

基于核酸检测-实时荧光qPCR技术自主研发生产了：

试剂盒根据无菌检查替代和核酸检测方法的要求，对适用范围、专属性、检测限、耐用性、假阳性、假阴性进行了全面的性能验证，满足细胞制品对无菌快速检测的需求。

表3 细菌真菌检测产品性能参数

❖ 数据展示

检测限验证数据：

• 细菌提取检测试剂盒检测限验证（25-50 CFU）

• 真菌提取检测试剂盒检测限验证（5-10 CFU）

实际样品检测数据：对三十几个不同来源的干细胞、免疫细胞样品和相应的细胞制剂样品进行了测试，可有效进行真菌、细菌及阳性对照的检测。

• 真菌检测结果

• 细菌检测结果

参考文献：

[2] European Pharmacopoeia10.0．2.6.16 Tests for extraneous agents in viral vaccines for hunman use.

[3] WHO．Recommendations for the evaluation of animal cell cultures as substrates for the manufacture of biological medicinal products and for the characterization of cell banks．

[4] FDA．Characterization and qualification of Cell substrates and other biological starting materials used in the production of viral vaccines for the prevention and treatment of infectious diseases indications．

[5] CAR-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点[J].中国药事,2018,32(6):829-852.

[6] CDE.细胞治疗产品研究与评价技术指导原则（试行）.

[7] CDE.人基因治疗研究和制剂质量控制技术指导原则.

[8] CDE.人源性干细胞产品药学研究与评价技术指导原则.

[9] CDE.免疫细胞治疗产品药学研究与评价技术指导原则（征求意见稿）.

[10] CDE.溶瘤病毒产品药学研究与评价技术指导原则（征求意见稿）.

[11] 2020年版《中国药典》第四部-无菌检查法.

[12] European Pharmacopoeia10.0-2.6.1 Sterility．

[13] United States Pharmacopeia 43-NF 38--STERILITY TESTS.

[14] Electronic Code of Federal Regulations (e-CFR)-21 CFR 610.12 - Sterility.

[15] 2020年版《中国药典》第四部-通则9201.

[16] United States Pharmacopeia-<1223>Validation of Alternative Microbiological Methods.

[17] United States Pharmacopeia-USP<1071>Rapid microbial tests for release of sterile short-life products：a risk-based approach.

[18] European Pharmacopoeia-2.6.27 Microbiological examination of cell-based preparations.

[19] European Pharmacopoeia-2.6.21 Nucleic acid amplification techniques.