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2023-05-04
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细胞交叉污染长期以来未引起人们的重视，导致细胞生物学历史上发生了多起重大的细胞交叉污染而导致细胞误用的事件:
2016年中国科学院昆明细胞库公布了多达50多株的错误鉴定和交叉污染的细胞株。
著名的污染事件是1967年HEp-2和INT 407这两种细胞系被发现其实都是Hela细胞，据不完全统计这导致直接或间接浪费了约14亿美元，涉及发表SCI文章约7400篇。
2017科隆（Kolon）生命科学（音译）骨关节炎基因治疗药物“Invossa-K注射液”被发现是293细胞而不是软骨细胞。随后韩国食品药品安全处对该公司提起刑事诉讼，到目前为止已有438家医院和诊所注射了3707剂该药物（超过3000名患者）患者需要15年随访（费用约为6690万美元）。
目前，细胞种属鉴别和交叉污染检测受到诸多机构的重视，特别是对于生物制品用工程细胞来讲尤其重要。
图1 细胞被误用的历史事件概览
▋法律法规
➤ 2020 版药典中，规定新建细胞系/株、细胞库（MCB、WCB）和生产终末细胞（EOPC）均应进行鉴别试验，以确认为本细胞，且无其他细胞的交叉污染。
表2中国药典2015版细胞鉴定项目的基本要求（部分）
➤FDA、FDA、ICH、WHO 要求对用于制药领域的实验中所使用细胞系应进行“身份鉴定”和纯度测试，包括细胞库（MCB、WCB）和生产终末细胞（EOPC）。
表2 FDA、ICH、WHO关于细胞鉴定项目相关的法律条文摘录
▋细胞种属鉴别的方法
2020版中国药典《生物制品生产检定用动物细胞基质制备及鉴定规程》提到：细胞鉴别试验方法有多种，包括细胞形态、生物化学法（如同工酶试验）、免疫学检测（如组织相容性抗原、种特异性免疫血清）、细胞遗传学检测（如染色体核型、标记染色体检测）、遗传标志检测（如 DNA指纹图谱，包括短串联重复序列STR、限制片段长度多态性RFLP-PCR和内含子多态性EPIC-PCR法等）以及其他方法（如杂交法、PCR法、报告基因法等），应至少选择上述一种或几种方法对细胞进行种属和细胞株间及专属特性的鉴别。
其中STR图谱分析法是目前细胞鉴别及交叉污染检测的常用方法，但该方法仅适用于人源及鼠源细胞种属鉴别的检测，所以应用范围受到很大限制。染色体核型分析和同工酶技术也常被用于细胞鉴别及交叉污染检测，但此类检测方法具有细胞用量大、操作复杂、耗时长及成本高且检测灵敏度低的缺点。因此开发一种灵敏、快速、稳定且操作简便、特异性强的方法，用于生物制品生产涉及到的多细胞鉴别和种属间交叉污染检测。
HZSKBIO®针对10个生物制品常用细胞种属【Bos taurus (牛)/ Mus musculus (小鼠) / Canis familiaris (犬)/ Rattus norvegicus (大鼠) / Cercopithecus aethiops (非洲绿猴)/ Macaca mulatta (恒河猴)/ Cricetulus griseus (中国仓鼠)/ Felis catus (猫)/ Homo sapiens (人) / Sus scrofa (猪)】研发设计了特异性PCR多重扩增引物和反应体系，可以根据给定的10组引物是否存在PCR扩增条带以及PCR扩增子的大小进行细胞种属鉴定和交叉污染检测（图2）。
注：
泳道1～10是单一细胞系为模板的PCR扩增子；
泳道11是以10种细胞系为模板PCR扩增产物电泳分布。
图2：HZSKBIO®细胞种属鉴别检测PCR产物电泳图
▋HZSKBIO®细胞种属鉴别检测试剂盒技术特点：
◆ 特异性高：PCR扩增子明确单一，电泳结果清晰无杂带。
◆ 操作简单：试剂盒含提取缓冲液，提取细胞DNA后直接进行PCR扩增，免去了复杂的细胞DNA提取纯化过程。
◆ 检测灵敏度高：细胞用量可少至5×105，交叉污染检测限可达到1%及以下。
◆ 检测效率高：采用单孔10重反应体系，提高了检测效率。
◆ 真实客观：以细胞数量为单位来反应可能存在的污染情况。
◆ 结果确定：根据扩增子的条带数量和条带大小进行结果判定，更清晰明了。
◆ 自主研发和稳定供应：组分自主研发，可保证供货和批次间质量稳定。
