通过工程细胞(如细菌、酵母或哺乳动物、昆虫或植物细胞系)重组技术生产的生物制品在其生产过程中,一些非产品的、宿主细胞来源的物质会不可避免地进入工艺中。这一过程将产生目标产物和宿主细胞来源的杂质,包括宿主细胞蛋白(HCPs)的混合物,以及其他与工艺相关的杂质。残留HCPs有可能影响产品的质量、安全性和有效性。生物制品中HCPs的主要问题是其有诱导机体产生抗HCP抗体的可能性,这些抗体可能会引起患者产生临床症状。此外,HCPs可能作为免疫佐剂,诱导产生抗药抗体,影响药物安全性或有效性。HCPs对产品本身的质量也有直接的影响。例如,有蛋白水解功能的HCPs,即使是极少量的HCPs,也能逐渐水解产品蛋白,减弱或消除产品的生物学效力,或者改变产品的稳定性。因此通过工艺纯化使得终产品中的HCPs的残留量尽可能低,并需要建立良好的方法来检测HCPs的残留量。
      目前生物制品中HCPs的常用检测方法为免疫分析方法,此技术相对简单,精度良好,方便设定控制范围和建立技术规范。而HCPs免疫分析方法的设计和验证涉及到许多独特和重大的挑战,原因在以下几点:

✔   可能存在的HCP种类繁多;

✔   一般使用多克隆抗体来检测;

✔   缺乏准确匹配的定量标准品;

✔   在某些情况下,样品稀释效应会产生相当大的影响;

✔   检测单一HCP的内在局限性。

由于HCPs免疫分析的复杂性,并且HCP检测是工艺开发和产品质量控制的重要组成部分,需要仔细开发和表征HCP检测所需的关键试剂:

●  制备抗HCPs抗体的免疫原

●  抗HCPs多克隆抗体

● HCPs标准品

① HCPs检测服务

     ② 抗HCPs多克隆抗体表征

抗体对(捕获和检测)的质量通常评估以下两方面:

  表明在给定的纯化中获得的一系列样品(包括DS)含有的HCPs,抗体对其是特异的和灵敏的。

  表明标准品中的多种HCP可被识别(即,HCPs的覆盖范围是足够的)。

因此,企业在采用商业化ELISA试剂盒或者是自己开发的ELISA试剂盒时,务必需要完成上述两方面的评价工作。



2D SDS-PAGE/Western blot抗体覆盖率分析案例

覆盖率计算公式:



    ③ 客户定制化HCPs ELISA试剂盒开发

             抗原/HCPs标准品的表征、制备和稳定性研究
             抗HCPs多抗的制备和表征
             ELISA试剂盒的生产
             HCPs ELISA试剂盒分析性能验证
             方法学转移



工艺特异性ELISA试剂盒定制开发案例

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